PCR檢測作為體外診斷領域的核心技術，近年來隨著市場需求的更新，為確保在新冠疫情、非洲豬瘟等大規模疫情爆發和管控過程中檢測結果的及時、準確，IVD企業紛紛開始全預混產品的開發，各大原料廠家也及時在原料端進行迭代更新，可全預混試劑嚴重的非特異擴增現象依舊困擾著大家，成為無法徹底解決的難題。如何解決全預混試劑的非擴增特異性問題已然成為當下分子生物學領域的一大挑戰。目前熱啟動DNA聚合酶的封閉效果只有90%-95%，一旦把引物探針和酶以及buffer全部預混，未封閉住的酶活會使體系產生大量的非特異性擴增。為彌補熱啟動酶這一缺陷，徹底解決非特異性擴增問題，奧利芙生物隆重推出革命性新產品：熱啟動dNTP—“Thermal-initiated dNTP Mix”！
產品介紹

Thermal-initiated dNTP Mix是由奧利芙生物公司研發的革命性創新產品。它是一種經過特殊化學修飾的脫氧核糖核苷酸，正常情況下，Thermal-initiated dNTP Mix無法參與磷酸二酯鍵的生成，只有經過熱激之后，Thermal-initiated dNTP Mix才會變成普通dNTP參與PCR擴增。該產品能夠顯著減少由非特異退火或引物二聚體引起的非特異擴增。

Thermal-initiated dNTP Mix在 -20°C 下可穩定保存至少一年。它能兼容各種熱啟動 DNA 聚合酶，適用于普通 PCR、快速熱循環 PCR、多重 PCR 和實時熒光定量 PCR 等多種 PCR 系統，配合熱啟動DNA聚合酶一起使用，可以最大限度降低非特異性擴增。

產品特點

1.常溫下封閉效果好

為了驗證Thermal-initiated dNTP Mix的封閉效果，我們選擇在恒溫PCR（lamp）體系進行封閉效果驗證，整個PCR過程中溫度不超過60℃。

當全預混體系放置3天，結果顯示與普通dNTP相比 Thermal-initiated dNTP Mix表現出完全的封閉性，無信號檢出（圖1-A，未加熱藍色框）。
把Thermal-initiated dNTP 組分單獨提前95℃熱激30s后，其擴增效果與普通dNTP相當（圖1-B）。

圖1-A 恒溫PCR體系下，Thermal-initiated dNTP Mix 封閉效果圖

圖1-B Thermal-initiated dNTP單獨提前熱激活之后，熱啟動dNTP與普通dNTP在lamp體系中的擴增效率對比

2.熱激后釋放效率高

在變溫PCR條件下，Thermal-initiated dNTPMix無需單獨加熱，在正常的PCR程序中就可以完全釋放。Thermal-initiated dNTP Mix在釋放速度快的基礎上，其擴增效率仍與dNTP一致（如圖2A）等溫lamp條件下，Thermal-initiated dNTP Mix組分單獨加熱30s，其封閉效果即可快速解除，并且擴增效率與dNTP幾乎一致（如圖2B）。

圖2 變溫PCR體系下，Thermal-initiated dNTP Mix 與普通dNTP擴增效果對比圖

3.有效減少非特異性擴增的產生

為了探究Thermal-initiated dNTP Mix對于減少非特異性擴增的效果，我們進行了毛細管電泳實驗。在STR超多重體系下，我們將Thermal-initiated dNTP Mix和普通dNTP產品做對比。結果顯示，熱啟動DNA聚合酶與普通dNTP產生大量非特異擴增(圖4下紅色方框內)，相比之下，Thermal-initiated dNTP Mix 與熱啟動DNA聚合酶共同作用顯著減少非特異性擴增(圖4 紅框區域)。