一代測序
一代測序又稱Sanger測序,由Frederick Sanger于1977年發明,是最早的基因測序技術,被稱為基因檢測的金標準。Sanger測序的原理是將雙脫氧核苷酸(ddNTP)參入到新合成的DNA鏈中,由于參入的ddNTP缺乏3’-羥基,因此不能與下一位核苷酸反應形成磷酸二酯鍵,DNA合成反應將終止。Sanger法測序由一套四個單獨的反應構成,每個反應系統包含四種脫氧核苷三磷酸dNTP,可以正常合成DNA。每個反應系統加入四種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP),ddNTP隨機取代相應的dNTP,由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-0H基團不能繼續延伸,使延伸的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止的核苷酸由相應的ddNTP決定,為了方便定位,一般選用熒光或者同位素將其標記,通過電泳可分離出長度不同的片段,再對這些片段的末端堿基進行檢測從而獲得所測片段的堿基序列。
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