實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，簡稱qPCR）是一種在PCR反應體系中加入熒光物質，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
實時熒光定量PCR反應中所使用的熒光物質可分為熒光探針和熒光染料兩種：
1. 熒光探針：該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。在PCR反應體系中加入特異性的熒光探針，當探針完整時，報告基團發射的熒光信號會被淬滅基團吸收，熒光檢測系統無法接收熒光信號；在PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

2. 熒光染料：在PCR反應體系中加入SYBR熒光染料，SYBR熒光染料可以非特異性地摻入DNA雙鏈，從而發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，以此來保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。