PCR
PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶鏈式反應,是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點,體系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、擴增增強因子,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程,能快速特異地在體外擴增任何目的DNA,目前PCR技術已被廣泛應用于與分子生物學相關的各個領域。
PCR反應體系的主要成分包括:模板 、Taq DNA 聚合酶、引物、dNTP和反應buffer等。其中dNTP是deoxy-ribonucleoside triphosphate(脫氧核糖核苷三磷酸)的縮寫,是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在內的統稱,“d”指deoxidize,deoxy-,脫氧;“N”代指含氮堿基,代表A、T、G、C、U等中的一種;TP指triphosphate,三磷酸鹽。dNTP的質量與濃度和PCR擴增效率有密切關系,在PCR反應中,4種dNTP的濃度要相等( 等摩爾配制),如其中任何一種濃度不同于其它幾種時(偏高或偏低),就會引起錯配。dNTP的濃度應為50-200μmol/L,濃度過低會降低PCR產物的產量;dNTP能與Mg2+結合,因此dNTP濃度過高會使游離的Mg2+濃度降低,進而影響PCR擴增。
如何挑選高質量的dNTP對于PCR反應至關重要,1. dNTP的純度要高,2.dNTP的凍融穩定性要好,3.dNTP的批間穩定性要強,4.dNTP中無人或者細菌基因組殘留,5.dNTP中不應有DNase、RNase、切割酶等殘留。
相關產品推薦
奧利芙生物重磅推出分子生物學級高質量產品,歡迎訂購!